用途
觀察未經(jīng)染色的標(biāo)本和活細(xì)胞。
基本原理
利用物體不同結(jié)構(gòu)成分之間的折射率和厚度的差別,把通過物體不同部分的 光程差轉(zhuǎn)變?yōu)檎穹?光強(qiáng)度)的差別,經(jīng)過帶有環(huán)狀光闌的聚光鏡和帶有相位片的相差物鏡實(shí)現(xiàn)觀測的顯微鏡。主要用于觀察活細(xì)胞或不染色的組織切片,有時(shí)也可用于觀察缺少反差的染色樣品。
把透過標(biāo)本的可見光的光程差變成振幅差,從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對(duì)比度,使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見。光線透過標(biāo)本后發(fā)生折射,偏離了原來的光路,同時(shí)被延遲了1/4λ(波長),如果再增加或減少1/4λ,則光程差變?yōu)?/2λ,兩束光合軸后干涉加強(qiáng),振幅增大或減下,提高反差。在構(gòu)造上,相差顯微鏡有不同于普通 光學(xué)顯微鏡4個(gè)特殊之處:
1.環(huán)形光闌(a nnular diaphragm) 位于光源與聚光器之間,作用是使透過聚光器的光線形成空心 光錐,焦聚到標(biāo)本上。
2.相位板(annular phaseplate)在 物鏡中加了涂有 氟化鎂的相位板,可將 直射光或衍射 光的相位推遲1/4λ。分為兩種:
(1)A+相板:將直射光推遲1/4λ,兩組光波 合軸后光波相加,振幅加大,標(biāo)本結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加變亮,形成亮反差(或稱負(fù)反差)。
(2)B+相板:將衍射光推遲1/4λ,兩組光線合軸后光波相減, 振幅變小,形成暗 反差(或稱正反差),結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加變暗。
3.合軸調(diào)節(jié)望遠(yuǎn)鏡:用于調(diào)節(jié)環(huán)狀光闌的像與相板共軛面完全吻合。