顯微鏡脫水與樣品附著:由于多次離心使細(xì)胞丟失,光學(xué)顯微鏡因此Z好先將細(xì)胞附著在玻片或塑料片表面,使細(xì)胞隨同該玻片或塑料片一起脫水、干燥。光學(xué)顯微鏡對(duì)玻片厚度的要求為使細(xì)胞能附著在玻片或塑料片,需先在玻片或塑料片上鋪設(shè)一層膜.鋪膜方法如下:
(1)光學(xué)顯微鏡Z簡(jiǎn)單的方法是鋪一層薄的聚乙烯醉縮甲醛膜。將洗凈的玻片在(0.5-1)%聚乙烯醉縮甲醛氯仿溶液中浸葵,待氛仿?lián)]發(fā)后玻片上呈現(xiàn)一層白膜,將玻片在抓仿中振蕩幾次使膜變薄即可用。
(2)將0.1緯多聚L-賴氨酸(制備時(shí)將1mg多聚賴氨酸溶于l ml過(guò)濾后的水中)滴在洗凈的玻片上,待液滴展開后在450C供箱中干燥.此種方法Z好,因?yàn)槎嗑跮-賴氨酸帶正電荷,能使較多的表面帶負(fù)電荷的細(xì)胞附著。
(3)尼康顯微鏡將血漿和甘油各以(30--'40)%,光學(xué)顯微鏡對(duì)玻片厚度的要求和((3^-5)%的比例加到蒸餾水中,成為甘油蛋白液。將該液滴在洗凈的玻片上,光學(xué)顯微鏡展開并烘干。將鋪好的蛋白膜浸入2%戊二醛中使蛋白固定,洗凈后干燥可備用。使用前將血漿滴在該蛋白膜上使之“活化”, 30分鐘后用緩沖液沖洗,便可直接應(yīng)用。
顯微鏡將固定與清洗后的細(xì)胞用過(guò)濾后的水制成濃度適宜的細(xì)胞懸液,光學(xué)顯微鏡懸滴在已鋪好膜的玻片或塑料片上,在濕潤(rùn)、低溫(40C)環(huán)境中放置(30-120)分鐘.使細(xì)胞附著到膜上。用細(xì)鑷子夾起玻片在清潔的雙蒸水中振蕩,光學(xué)顯微鏡洗去未附著的細(xì)胞。
光學(xué)顯微鏡對(duì)玻片厚度的要求偏光顯微鏡然后迅速放入盛有50%丙酮〔或乙醉)的器皿中。脫水過(guò)程是將玻片每隔約3分鐘,依次放入濃度遞增的丙酮或乙醉中,光學(xué)顯微鏡或在放玻片的器皿中不斷增加脫水劑濃度。據(jù)作者所在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn),后一種操作比較方便.光學(xué)顯微鏡具體做法可每隔3分鐘將器皿中的脫水劑吸出一半,再加入濃度為****的等量脫水劑。經(jīng)過(guò)5-.6次操作,光學(xué)顯微鏡對(duì)玻片厚度的要求顯微鏡價(jià)格器皿中脫水劑濃度達(dá)”.5%以上,細(xì)胞脫水成功。臨界點(diǎn)干燥后將玻片或塑料片用導(dǎo)電膠粘于樣品墩上進(jìn)行金屬鍍膜.利用第三種方法鋪設(shè)的膜附著細(xì)胞也有方便之處。光學(xué)顯微鏡可將經(jīng)低濃度戊二醛固定后的細(xì)胞懸滴在“活化”后的蛋白膜上,光學(xué)顯微鏡對(duì)玻片厚度的要求放置10分鐘,將玻片或塑料片浸于2%戊二醛中,30分鐘后用過(guò)濾雙蒸水沖清,再按上述方法脫水、干操及金屬鍍膜。