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為什么顯微鏡觀察物體需要切成薄片,透光進行觀察?用反射光不行嗎?

時間:2023-08-08 13:48:05 點擊:57次

當然可以啊,體視顯微鏡就是反射光,只是放大倍率比較低。更高倍率的反射光源的有金相顯微鏡,是材料,電子和冶金行業用的,用來觀察樣品的微觀表面(生物學能用到的大概只有古生物,他們的標本就是石頭,只能先把化石剖面研磨得超光潔,用金相鏡觀察細節)

那問題就來了,為什么生物樣本,想觀察更微觀的結構就不能用體式顯微鏡了呢?你可以拿金相顯微鏡觀察一下生物樣本,應該就能理解了。能看見東西,但不清楚。有時候一片糊,有時候還會有五顏六色的光暈。

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因為生物樣品是透明的。透明的樣品,如果光源在下面,顯微鏡靠收集透射光觀察,那信息就比較單純:被樣本吸收掉的光,就是暗信號,透過來的就是明信號,顯像就像白底黑字清清楚楚。

但如果光源在上面,顯微鏡靠收集反射光觀察,問題就來了。光源的光線以一定角度照射在樣品上,一部分光從上表面就反射回來;一部分光射入樣品內部,遇到密度變化的界面再反射回來;一部分光源一直射到樣本的下表面,再反射回來;還有一部分直接射穿樣品,從下背景板上反射回來。這些信息一股腦被接受成像,小倍率下沒問題,因為景深很大;但在大倍率下,就會遇到一個麻煩——中學就學過,光有波動性,會有干涉現象。來自不同深度的反射光,存在相位差;而那種尺寸很小的微觀結構,會明顯地觀察到這種相位差帶來的光干涉現象(請回憶一下水面上五顏六色的油膜,中學物理就講過原理了)。所以生物樣品看起來就像萬花筒。

所以反射可見光源顯微鏡看透明樣品,沒法用高倍鏡。高倍只能切成薄片,用透射光觀察。

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